Quelles sont les différentes phases en Chromatographie?
Dans cette page, découvrez les différentes phases utilisées en chromatographie et le rôle des gaz associés.
Le principe de la chromatographie
La chromatographie est une technique d'analyse (chimie analytique) utilisée pour séparer les constituants de l'échantillon (gazeux ou liquide). Elle le fait traverser un milieu dans lequel ses composants se déplacent à différentes vitesses, permettant sa séparation et ensuite sa quantification. Elle comporte généralement trois phases principales :
- Phase stationnaire : phase qui ne se déplace pas pendant la séparation. Elle peut être sous forme solide (chromatographie sur colonne) ou liquide (chromatographie liquide sur colonne). La phase stationnaire retient les composants du mélange.
- Phase mobile : phase qui se déplace à travers la phase stationnaire. Elle peut être un liquide (chromatographie liquide sur colonne) ou un gaz (chromatographie gazeuse). La phase mobile transporte les composants du mélange à travers la phase stationnaire.
- Détection : phase durant laquelle les composants séparés sont détectés. Les techniques de détection courantes comprennent la Spectrométrie de Masse, la Spectrométrie de Fluorescence et la Spectrométrie UV-visible.
Les classes de chromatographie
Les techniques de chromatographie se divisent généralement en deux grandes classes, en fonction de la phase mobile :
- La chromatographie en phase gazeuse : la phase mobile est un gaz tel que l'hélium, l'hydrogène, l'argon et l'azote.
- La chromatographie liquide : la phase mobile est un liquide tel que les solutions de PBS éthanol, méthanol, etc.
La principale propriété des gaz vecteurs est leur insolubilité dans les liquides. Leur qualité (pureté et quantité d' impuretés présentes) est clé pour éviter des interférences avec la phase stationnaire (liquide ou solide).
Le bon choix des gaz évite l’interférence du signal électrique des échantillons qui n'apparaîtra pas sur le chromatogramme.
La gamme Air Liquide Alphagaz a été conçue avec les objectifs de qualité lors de la production et de contrôle des impuretés pour répondre aux besoins de la chromatographie.
Types de chromatographie et phases
Le tableau suivant présente les types de chromatographie les plus courants, leurs phases et leurs acronymes.
|
Phase mobile |
Phase stationnaire |
Technique |
Acronyme |
|
Gaz |
Solide |
Chromatographie gaz-solide |
GC/GSC |
|
Liquide |
Chromatographie en phase gazeuse |
CG/GLC |
|
|
Liquide |
Solide |
Chromatographie en phase liquide |
LC |
|
Chromatographie en phase liquide de haute performance |
HPLC |
||
|
Liquide |
Chromatographie en phase liquide |
LC |
|
|
Chromatographie en phase liquide de haute performance |
HPLC |
||
|
Super-critical |
Solide |
Chromatographie à fluide supercritique |
SFC |
|
Liquide |
Chromatographie à fluide supercritique |
SFC |
Les gaz dans les technologies de phase liquide
La chromatographie en phase Liquide couplée à des détecteurs de Spectrométrie de Masse est une méthode très précise avec une ample application. Ce qui la rend très populaire.
Le détecteur SM nécessite un flux d'azote pour :
- Éliminer efficacement le solvant de l’échantillon avant l’étape d’identification et de quantification.
- Nébuliser l'échantillon.
- Canaliser l'échantillon ionisé vers l'entrée du spectromètre de masse.
Solutions d’approvisionnement
Plusieurs solutions s’offrent aux laboratoires selon le nombre de LC-MS et leur taux d’utilisation:
- Bouteilles ou cadres (en fonction du volume nécessaire) avec une centrale d’inversion pour passer d’un emballage vide à un plein sans arrêt de fourniture.
- Récipient liquide avec évaporateur.
- Générateur d’azote sur site. Cette solution est possible compte tenu de la qualité de l’azote requise par le fabricant de l'analyseur (autour de N30 soit une pureté de 99,9%). L'utilisation d'un générateur d'azote est courante et confortable. Dans tous les cas, cet équipement de nature mécanique et électrique nécessite une maintenance et il est fortement recommandé de prévoir une solution de secours avec des bouteilles et un système de réseau de gaz (matériau adapté).
Chromatographie Supercritique
La chromatographie liquide supercritique utilise le CO2 (qualité Alphagaz SFC - 99,998% composition) fourni sous forme liquide selon plusieurs formats :
- Des bouteilles (50 litres eau volume) ou cadres avec tube plongeur.
- De petits récipients liquides.
Les principaux avantages de la SFC par rapport à la chromatographie liquide (LC) sont une meilleure efficacité des séparations de una mélange et une vitesse d'analyse plus rapide
Le CO2 supercritique (pression et température controlée) présente des avantages importants :
- Facilement disponible,
- Peu coûteux,
- Non toxique,
- Non explosif,
- N'est pas un solvant organique,
- Et assure un traitement doux du produit à des conditions de températures modérées (<100°C) ainsi qu'une séparation facile du solvant et de l'extrait.
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